BUNSEN資訊| 牛血清的介紹和概述

　　牛血清是動物血清中的一種，是細胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，也是一種常用的生物化學試劑，有著廣泛的應用。由于牛本身是大型動物，在研究上具有操作便捷性，收獲效率高等優(yōu)點，故牛血清行業(yè)應用非常普遍。

　　牛血清常分為胎牛血清，新生牛血清，小牛血清，成牛血清。

　　牛血清通常含有一定比例的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素;而成牛血清常被用作酸堿調(diào)節(jié)劑、細胞穩(wěn)定性外源調(diào)節(jié)劑和促進修復和重組等。

　　【胎牛血清】(Foetal Bovine Serum，簡稱FBS)：是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段，血中含有豐富的生長發(fā)育因子，非常適合各種細胞的培養(yǎng)，一旦胚胎發(fā)育這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來使用。

　　【新生牛血清】(Newborn Calf Serum，簡稱NBCS)：0—7天內(nèi)(也有說法是0—30天內(nèi));

　　【小牛血清】(Calf Serum)：采自出生30天至1年的小牛。

　　【成牛血清】(Adult Bovine Serum，簡稱ABS)：采自成年牛收全血后分離得到血清。

　　怎樣篩選合適的胎牛血清是細胞培養(yǎng)中一個非常關鍵的步驟，首先，將產(chǎn)品測定其pH值，非常重要，要保持在7.4至7.6的pH范圍內(nèi);接下來，要檢查有效成分， 檢查其中的細胞因子、培養(yǎng)基添加劑和免疫抑制因子的質(zhì)量水平;最后，細胞存活率的測定也很重要，由于內(nèi)毒素直接參與細胞凋亡，對細胞培養(yǎng)結(jié)果影響較大，且不同批次的血清，內(nèi)毒素差異又不易控制，牛血清的質(zhì)量越高，細胞的生存率和能力也越高，可以替代部分試劑中添加的有機物。

　　內(nèi)毒素含量越低，級別越高，以胎牛血清為例：

　　血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時，此血清為特級胎牛血清;

　　血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時，此血清為優(yōu)級胎牛血清;

　　血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時，此血清為標準級胎牛血清;

　　胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的作用：

　　1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

　　2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

　　3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

　　4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

　　5.起酸堿度緩沖液作用。

　　6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

　　7.參與細胞凍存。

　　在細胞培養(yǎng)中，胎牛血清加入基礎培養(yǎng)基的濃度大多為5%～20%(最常見為10%)的。具體到不同試驗，應依據(jù)文獻報導，或細胞類型或基礎培養(yǎng)基的成分來確定相應濃度。胎牛血清應在-20℃儲存，運輸應干冰冷鏈運輸，避免反復凍融，確保血清中因子活性不受影響，保證血清優(yōu)良品質(zhì)

　　儲存條件：-20°C凍存。

　　胎牛血清解凍后，應按單次習慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。

　　若置于4°C的血清，應在一周內(nèi)用完，用量頻率少推薦使用EvaCell免分裝50ml的規(guī)格哦

　　血清和培養(yǎng)基的配制，應遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配"原則，保證更好的細胞培養(yǎng)效果。配好的培養(yǎng)液，應于一周內(nèi)用完。

　　血清避免反復凍融，避免在4°C或更高溫度儲存過久，否則會破壞血清中有效活性成分和被污染，影響血清品質(zhì)。

　　血清融化注意：

　　在水浴過程中，血清的平面要浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身，使血清混勻，但搖動中盡量不要產(chǎn)生泡沫!

　　胎牛血清使用說明：血清從-20℃取出后，融化，按推薦體積加入到基礎培養(yǎng)基中，混勻，制備成新鮮培養(yǎng)基(整個操作需在無菌超凈臺中進行，注意無菌操作)。配制好的培養(yǎng)基推薦在4℃保存，應在1周內(nèi)用完。

　　關于熱滅活：胎牛血清不推薦熱滅活。

　　熱滅活一般是指在做免疫相關的試驗中，通過加熱滅活掉血清中的補體，以避免對免疫試驗的影響。

　　在胎牛血清中，由于胎齡原因，尚未形成完整的補體系統(tǒng)，因此，胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。

　　并且，熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減，進而影響細胞培養(yǎng)效果。

　　若針對某些特殊試驗，對于胎牛血清一定要做熱滅活，國際上推薦熱滅活的方法：40℃水浴,20min。

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